分子生物学では、優れたバッファーの選択と異なるDNA単離ステップの準備は、タンパク質発現への移行と最初からやり直すための別のmaxi-prepキットのオープンとの間の違いになります。それらの決定的な重要性にもかかわらず、バッファレシピはしばしば単なるそのレシピであり、レシピはさまざまなコンポーネントの説明や論理的根拠なしに書かれています。そのような緩衝剤の１つはグルコース - トリス - ＥＤＴＡまたはＧＴＥ緩衝剤である。
$config[code] not foundGTEは何のために使用されますか？
GTEは、細胞を溶解（破砕）してプラスミドDNAを内部に回収する前に、細菌細胞ペレットを再懸濁するために使用されます。細胞膜を柔らかくするリゾチームは、しばしばGTEバッファーと一緒に添加されます。この段階で全細胞を均一に懸濁して、その後添加する溶解液がすべての細胞に到達できるようにすることが、良好なDNA収量を得るための鍵となります。 GTEは、DNAに安定した環境を提供しながらこれを行うように設計されています。
浸透圧のためのグルコース
細胞外の溶質濃度が細胞内のそれに近いところで浸透圧を維持するために、５０ｍＭ（ミリモル）グルコース糖をＧＴＥ緩衝液に加える。これにより、凝集や分解のためにDNA収量が低下する可能性がある早期の細胞溶解を防ぎます。緩衝剤の他の成分もまた溶液の浸透圧に寄与するが、グルコースは、非電解質であり、それは溶液の緩衝剤特性を妨害しないので、良い選択である。
pH安定性のためのトリス
トリスは、非常に一般的なpH緩衝剤であるトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンの略称です。 ＧＴＥ緩衝液の場合には、酸塩（トリス−ＨＣｌ）を２５ｍＭの濃度で緩衝液に添加する。これは溶液のｐＨを生理学的に近い８．０、プラスミドＤＮＡの酸加水分解（分解）および他の細胞成分の望ましくない副反応を防ぐための理想的なｐＨに維持する。
EDTAはDNA分解を防ぎます
ＥＤＴＡ、またはエチレンジアミン四酢酸は、溶液から金属イオンを捕捉または「キレート化」し、それらが望ましくない副反応に関与するのを防止する。 ＧＴＥ緩衝液中に、ＥＤＴＡを１０ｍＭで添加する。その主な目的は、遊離亜鉛、マグネシウム、およびカルシウムを切り上げる緩衝液にあり、それによってそれらの金属を必要とする特定の経路によるDNA分解を防ぐことです。
いくつかの重要なヒント
あなたのGTE緩衝液を冷たく保ち、その中の意図しない細菌の増殖を防ぐために少量にしてください。砂糖と制御されたpHは素晴らしい成長培地を作ります。必ず純水を使用してください。水道水はパイプからの過剰な金属イオンを含むことがあり、これはEDTAが捕獲する能力を圧倒することがあります。サンプルに干渉RNAが含まれていると思われる場合は、GTEバッファーに100 µg / mLのRNase Aを加えて問題を解決してください。
